质谱流式技术(MassCytometry)结合了传统流式技术高效的单细胞研究能力和飞行时间质谱的全谱高分辨率优势,采用金属标记抗体与待测抗原结合,实现了单细胞水平的高通量分析,并且能够同时获得单个细胞的多种参数,识别不同靶向蛋白。通过对传统流式和质谱技术加以整合,它继承了传统流式细胞仪的高速分析的特点,又具有质谱检测的高分辨能力,并且克服了传统流式荧光发射基团光谱重叠的问题。质谱流式与单细胞转录组测序相比,质谱流式技术能够直接获得蛋白水平的信息,捕获检测的细胞也更多,信息更丰富。
质谱流式技术采用金属标记的抗体识别细胞表面或胞内的抗原,标记后的细胞经雾化后被分离成单个细胞进入电感耦合等离子体矩管中进行离子化,离子云随后被传输至飞行时间质量分析器中,检测器依次记录各种金属离子到达的时间,检测出每个细胞中各种标签金属的含量,最终形成不同的金属离子信号峰。检测产生单个细胞质谱数据,再通过分类、聚类和降维算法进行处理,反映基于靶蛋白丰度的各种细胞群体的表型和功能。
生物信息分析流程
通过对下机数据质量评估后,进行表达水平标准化;利用TSNE、UMAP和flowSOM等方法进行降维、聚类分析。使用公共的细胞类型注释数据集或者人工提供的数据集,对聚类结果进行细胞类型注释,针对差异分组的数据做细胞亚群比例差异分析。此外,依据数据情况,研究相关性或者感兴趣部分,选择重点蛋白及其
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