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感受态细胞是分子蛋白生物学实验中常用的一种菌株。常见的感受态有：用于蓝白斑筛选鉴别的DH5a；用于表达毒性或非毒性蛋白的BL21菌株；用于DNA及质粒克隆的TOP10菌株等。但是你知道吗？其实感受态细胞也能DIY，小编就带领大家了解一下吧，动手能力强的小伙伴也可以试试噢。
一、化学感受态细胞的制备原理
化学感受态细胞基本上是经过化学处理的细菌，使细菌能够在情况需要时，吸收外源质粒DNA。当大肠杆菌的细胞膜被激活使质粒可以轻松进入细胞内部，这种吸收外源DNA的状态称为能力，化学感受态细胞主要是通过热休克进行转化。
感受态细胞上图中我们看出：图A中的细胞膜完整，外源DNA无法渗透；图B中的细胞通过处理，细胞膜通透性，外源DNA可以渗透；要制备具有化学感受态的细胞，需要培养一批大肠杆菌并进行继代培养。然后，在大肠杆菌生长的对数增长进行收集，成为制备感受态细胞的原材料。因此，在对数生长期收集细胞至关重要。
整个实验过程中，由于是不添加抗生素的，所以我们需要注意无菌操作，谨防感染。细胞收获后，含有15%v/v甘油，浓度为mM的CaCl2缓冲液进行处理，使膜对质粒DNA具有半渗透性。
完成之后，将细胞分装出来，置于在-80°C下冷冻即可。冷冻时注意加入定量的甘油成分，防止冻伤细胞。
二、制备前的准备：
1.在LB肉汤中生长的大肠杆菌菌株的新鲜过夜培养物。
2.进口的无菌离心管。
3.用于读取大肠杆菌光密度的光谱仪。
4.含有15%v/v甘油的CaCl2，浓度为mM。
5.可耐-80°C以下环境的离心管或冻存管。
感受态细胞三、感受态细胞DIY实验步骤
1.接种目的大肠杆菌菌株在10mL的无菌LB培养基中。于37°C下培养过夜，以rpm的速度摇晃。
2.将1mL的过夜培养物重新接种到99mL的无菌LB中，并在37°C下以rpm的速度摇动，直到达到nm（OD）的光密度为0.3–0.5（对数中期）。
3.将mL培养物平均分配在无菌离心管之间，并在4°C下以~rpm离心10分钟收集细胞。丢弃上清液并使用瑞宁移液器去除残留的任何液滴。
4.将20mL，mM的无菌CaCl2溶液添加到细胞中，并轻轻地重新悬浮细胞。
5.在4°C下以rpm左右的冷冻离心机离心10分钟左右，收集洗涤过的细胞并丢弃上清液。
6.加入5mL，mM的无菌CaCl2，并辅以15%v/v甘油，然后轻轻地摇匀，使其重新悬浮。
7.用耐冻的离心管进行分装，每管的分装量以50μLaliquits为宜。
8.将制备好的化学感受态细胞储存在-80°C环境中。效期约为1年。
感受态细胞制备实验中的注意事项：
在进行感受态制备的过程中需要注意以下几点：
由于具有化学活性的细胞失去细胞膜屏障，比较脆弱，所以在对大肠杆菌进行处理时需要轻柔对待。
由于培养物中不含抗生素，所以无菌操作很重要，尤其在进行细胞的OD检查时。
在为整个实验室组制备感受态细胞时，需要进行分装登记并做好标识，置于-80以下环境中保存。
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